简介
用加样枪或Pasteur吸管吸取集落,移至培养瓶或多孔板的培养孔中。
6孔板底面积9.6cm2,加培养液的量2.5ml。12孔板底面积4.5cm2,加培养液的量2ml。24孔板底面积2cm2,加培养液的量1ml。96孔板底面积0.32cm2,加培养液的量0.1ml。无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在活体。
操作方法
悬浮细胞克隆的分离
原理
铺不满。24孔板加500ul培养基,100ul太少,底都铺不满,筛选药物浓度需要维持10天,中间无法传代,所以开始密度要低,保持在10%至30%以下
用加样枪或Pasteur吸管吸取集落,移至培养瓶或多孔板的培养孔中。
材料与仪器
24孔板下室一般加入600μl含20S的培养基。取细胞悬液100μl加入Transwell小室。特别注意的是,下层培养液和小室间常会有气泡产生,一旦产生气泡,下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了,在种板的时候要特别留心,一旦出现气。
生长培养基多孔板培养瓶解剖显微镜移液器粗头笔黄色枪头
步骤
1. 用倒置显微镜观察培养皿中的细胞,用毡制粗头笔或Nikon标记笔标记出集落。 2.24孔板的每一孔中加1 ml培养基。 3.解剖显微镜(20~50×放大)下挑取集落 (a)每一个细胞集落用一个枪头(加样枪上的黄色枪头)。 (b)将移液器调至100μl。 (c)先用枪头吸大约50μl的培养基,将该枪头对准要分离的集落,在集落内轻轻吸取剩余的50μl。 4.将吸取物移至24孔板,用培养基冲洗集落,如果培养基中含美希索,集落就会固定、黏附,然后生长;如果培养基含有琼脂,6孔板加多少培养基,则需用吸管在培养孔内上下吹吸集落几次,分散琼脂。细胞克隆也可以直接移至竖直放置的25 cm2的塑料培养瓶中。
1. 用倒置显微镜观察培养皿中的细胞,用毡制粗头笔或Nikon标记笔标记出集落。 2.24孔板的每一孔中加1 ml培养基。 3.解剖显微镜(20~50×放大)下挑取集落 (a)每一个细胞集落用一个枪头(加样枪上的黄色枪头)。 (b)将移液器调至100μl。 (c)先用枪头吸大约50μl的培养基,将该枪头对准要分离的集落,在集落内轻轻吸取剩余的50μl。 4.将吸取物移至24孔板,用培养基冲洗集落,如果培养基中含美希索,集落就会固定、黏附,然后生长;如果培养基含有琼脂,则需用吸管在培养孔内上下吹吸集落几次,分散琼脂。细胞克隆也可以直接移至竖直放置的25 cm2的塑料培养瓶中。
24孔板最多加到3mL,800uL即可覆盖底板。一般根据培养时间常使用1-2mL。培养基是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生 素和水等。不。
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500微升就够了,六孔板加