一、实验简介
生工测序结果怎么比对,DNA测序菌种鉴定实验是一种基于DNA测序技术进行的微生物鉴定方法。该方法通常基于16S rRNA基因序列进行分析,该基因是细菌和古菌共有的序列,但在不同的菌株中存在变异。通过对菌株的16S rRNA基因进行PCR扩增和测序,可以确定菌株的身份,并与已知的细菌或古菌进行比对,以确定其亲缘关系。
服务项目
二、实验流程
1. DNA提取:从微生物培养物中提取总DNA。
2. PCR扩增:使用通用的16S rRNA基因引物扩增目标DNA。
3. 凝胶电泳:对PCR产物进行凝胶电泳检测。
4. DNA测序:对扩增产物进行测序,通常采用Sanger测序方法。
5. 数据分析:将测序结果与数据库中的16S rRNA序列进行比对,确定菌株的身份。
DNA测序菌种鉴定实验的优点是可以快速、准确地识别不同的微生物菌株,尤其是无法通过传统菌落形态或生化特性鉴定的菌
三、实验的应用
首先,看测序峰图,如果结果的彩图显示峰型是尖锐单一的,碱基所对应的编码是一致的,那么可以判断序列是可以使用的。如果出现双峰,信号中断等异常现象,那么需要重新制备或者克隆后再测序。其次,将PCR产物在NCBI上blast,看是。
2. 食品卫生:对于食品和饮料中存在的微生物进行鉴定,以确保产品的安全性和卫生质量。
3. 医学诊断:对于临床样本中的细菌和真菌进行鉴定,以帮助医生确诊疾病和制定最佳的治疗方案。
可以用另一端的引物进行测序,从另一端测序可以一直测到序列的末端,就可以在序列的末端得到 您的引物的反向互补序列。对于较长的序列,一个测序反应测不到头,因此就只能将您的pcr产物片 段克隆到适当的载体中,用载体上。
4. 植物保护:对于植物病原菌进行鉴定,以确定病害的种类和来源,并制定相应的防治措施。
5. 工业微生物学:对于工业微生物菌株进行鉴定,以了解其代谢途径、产物合成和应用潜力。
四、注意事项
1. 客户在做单菌落培养时,尽量稀释样品,挑单菌进行培养。若菌种不纯,会造成套峰,测序失败。
2. 客户送的菌体带致病性,请提前说明。
5) 选择 Test of Phylogeny 栏中的 Bootsrap , Replications 设定为1 000;在 Options Summary 栏中的 Model 项中,设定参数为 Kimura 2-Paramete r,最后选择 Compute ;6) 将分析结果采用Los Alamos HIV序列库提。
3. 其他问题,请咨询客服人员
PCR产物测试谱图
五、文献
· Kõljalg,U.,Nilsson,R. H.,Abarenkov,K.,Tedersoo,L.,Taylor,A. F.,Bahram,M.,... & Larsson,K. H. (2013). Towards a unified paradigm for sequence-based identification of fungi. Molecular ecology,22(21),5271-5277.
企业回外泌体是由细胞分泌而来的微小囊泡,直径约为30-200nm,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯状形态、双层膜结构,外泌体提取方式包括超速离心(差速离心)、密度梯度离心、尺寸排阻色谱试剂盒法、试剂盒等。研载生物科技(上海)有限公司采用超速离心法。
PCR产物电泳图