如何选择正确的方法进行细胞的支原体检测？支原体的检测方法有哪些？目前实验室常用的支原体检测方法有培养法、荧光指示细胞法、PCR 法、扫描电子显微镜法，这些方法各有优缺点。各实验室可根据具体情况，选择不同的方法，或几种方法联合使用。
一、培养法
培养法为最为经济可靠的方法，但其实验周期较长，所以常用来进行对怀疑细胞的最后甄别。常用于细胞及临床治疗细胞的支原体检查。
（一）材料与设备
1. 精氨酸肉汤培养基 按说明称量粉剂，蒸馏水配制， 高压除菌（加20％胎牛血清）。2. 支原体琼脂培养基 按说明称量粉剂，蒸馏水配制，高压除菌（加20％胎牛血清）。3. 其他 超净工作台、无菌吸管、试管架、培养试管／皿、37°C 培养箱。
（二）操作步骤
支原体是一种常见的细菌感染，常见的检查方法有以下几种：喉拭子检查：通过在喉咙后部拭取样本进行检查，可确定是否感染了喉炎支原体或肺炎支原体。血液检查：通过检查血液中的支原体抗体，可以了解感染是否已经存在，以及感染的严。
1. 样品的储存。样品取材后，最好尽快进行检测。样品如在24h 以内进行支原体检测， 可储存在2~8℃; 如果超过24h 样品应放置于－20℃ 以下保存。-20℃保存的样品，进行检测时需重新加入到对照培养细胞中，培养72h 后，取上清直接进行接种检测。2. 准备精氨酸肉汤培养基、支原体琼脂培养基（半流体）。3. 将样品分别接种到10ml 精氨酸肉汤培养基、半流体培养基中（已冷却至36℃） ，每支培养基接种样品0.5~ 1.0ml. 每种样品接种6 支精氨酸肉汤培养基，3 支半流体培养基。4. 接种6d 后，取3 支精氨酸肉汤培养基中样品0.5 ~ 1.0ml. 复种于精氨酸肉汤培养基中。5. 36 ℃ 培养29d，每隔3d 观察一次。记录实验结果。
（三）结果判断
培养结束时，精氨酸肉汤培养基如有支原体生长，则液体颜色改变（粉色或黄色) 。半流体培养基中如有支原体生长，则出现絮状沉淀
常用的检查的方法有支原体培养、血清学方法、代谢抑制试验、DNA探针和PCR技术等。一般取白带检查出支原体显示阳性表明有支原体感染，另外羊水、尿道分泌物也可用于检测。具体的检查方式需要根据患者的情况来选择确定。一般都是用杀。
二、荧光指示细胞法
荧光指示细胞法较为快捷，方法简单，但其灵敏度有一定的欠缺， 易造成漏检。
常见的支原体检测方法中最简单、最经济的方法是荧光指示细胞法。该方法使用的荧光染料是烟酸己可碱，其激发波长为350nm（紫外激发），发射波长为420nm。该染料会结合到DNA 中富含A-T 的区域，由于支原体的DNA中A-T 含量占多数(55%~80%），所以可被染色而检测到。支原体污染的细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一的荧光小点，即为支原体DNA，儿童支原体怎么查，证明该细胞有支原体污染。，
（一）材料与设备
（二）操作步骤1. 无菌收集待测细胞上清：悬浮细胞离心后取上清液。2. VERO 细胞爬片：将小爬片无菌置于小培养皿内，滴加VERO 细胞悬液(细胞浓度约3×104 个/ml) 2~3ml，置于CO2 培养箱内培养24h 使其贴壁。3. 制备标本。向6 孔板内滴加待检细胞上清液约1ml，注意设立对照组（已证实的支原体阳性和阴性细胞上清液），培养48h 后( VERO 细胞汇合前）将细胞爬片从平皿中取出。4. 漂洗—将细胞爬片置于培养皿中，用不含酚红、NaHCO3 的Hanks 溶液（或PBS) 漂洗3次。5. 固定—用乙酸：甲醇(1 : 3) 固定液固定 10 min 。6. 漂洗—待固定液自然风干后用去离子水漂洗3 次。7. 染色—置于Hoechst 33258 工作液(0.5μg/ml) 中染色10 min 。8. 漂洗—去离子水中漂洗3 次，每次1 ~2min 。9. 封片，紫外激发，观察。
（三）结果判断当阴性及阳性对照结果均成立时，结果有效 。1. 阴性结果 仅见待检细胞的细胞核呈现蓝色荧光。2. 阳性结果 荧光显微镜下细胞周围或细胞膜表面可见大小不等、不规则的蓝色荧光小点和丝状点。
（四）小结1. 严格配制工作液及封片液。2. 保证作为指示细胞的VERO 细胞没有被支原体污染。3. 必须同时设立阳性及阴性对照， 注意重复，以排除假阳性和假阴性结果。4. 应全面观察爬片，并注意可疑阳性的荧光点是凋亡小体还是支原体污染。5. 可适当调整荧光染料的工作浓度和染色时间，避免出现非特异性染色，如胞浆着色。
三、PCR 法
PCR 法检测支原体的方法最为快速、灵敏、取样量少，既可做细胞本身，也可做细胞上清的检测，同时可以检测多种支原体的污染，是目前常用的检测手段。但其成本较高，条件要求严格，且有时易出现假阳性或假阴性。弥补的方法是对怀疑的样品要经过3 次PCR 检测，或用培养法检测。
PCR 法是20 世纪80 年代中期建立起来的一种体外DNA 扩增实验，其基本原理是酶促DNA 合成反应，即在DNA 模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA 聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该实验具有灵敏度高、特异性强、检测快速的特点，但其对实验环境要求严格， 实验成本较高， 有时还会出现假阳性的现象。
（一）材料与设备支原体
（二）操作步骤
支原体衣原体可以通过培养的方法来检查，也可以通过抽血的方法来检查，通过培养的方法来检查更准确，抽血的方法检查是不准确的。病情分析：你好，支原体检查有两种，一是血液验血检查，二是口腔涂片培养。指导意见：目前，省级医院。
（三）注意事项PCR 反应的前期操作应在无菌环境中进行。注意假阳性、假阴性，有时需多次重复。
诊断支原体感染必需经过实验室检查，不能仅仅根据症状就作出诊断。目前诊断支原体感染用的是培养法和血清学检测法。(1)支原体培养 标本的取材，女性提倡子宫颈棉拭子取材，而不用尿培养。支原体的培养和鉴定是确诊支原体感染的。
四、扫描电子显微镜法
扫描电子显微镜法：扫描电子显微镜法非常直观、准确，对使用环境要求高，操作复杂，实验周期较长，常作为样品的最后定性检测。
（一）原理
利用电子显微镜的超级放大功能， 直接观察培养细胞中支原体污染情况。
（二）材料与设备
待检测细胞， 0.05％胰蛋白酶／0.02%EDTA 、2.5％的戊二酸、1％锇酸、0.1mol/L磷酸缓冲溶液（ pH7.4 ) ，扫描电镜及相关设备。
（ 三）操作步骤
（四）结果分析
支原体感染会使培养细胞慢慢枯萎，因此对培养细胞定期进行支原体检测非常重要。一般来说每1至3个月就应该进行一次支原体检测。将定期支原体检测常规化坚持下去，是细胞培养实验室应对支原体感染的关键。
